Rekombinante Protein Expression
Durch die Verwendung vielfältiger Expressionssysteme, inklusive bakterieller, Insekten- oder Säugetier- Expressionssysteme hat ALNA BIOSCIENCE die Möglichkeit auch schwierig zu exprimierende Proteine im Milligramm-Maßstab zu produzieren.
Unabhängig davon ob Sie sich der Leitsubstanzfindung, Testsystementwicklung, Vakzine-Produktion, Hochdurchsatz-Screening oder der Charakterisierung von Genprodukten widmen wollen, können wir für Sie die Lösung des Problems finden. Wir können für Sie eine breite Palette von Protein-Expressions-Systemen in hoher Qualität mittels bakterieller, Hefe-, baculovirus-/Insektenzell-, sowie Säugetierzell-Systeme bereitstellen und im Klein-
bis Großmaßstab realisieren.
E. Coli Expression
Transformation des Expressionsvektors in E.coli
Screening und Selektion von positiven Klonen
Evaluation der Expression durch SDS-PAGE or Western Blotting
Optimierung der Wirtszellen im Kleinmaßstab und Analyse in verschiedenen E.coli-Wirtsstämmen.
Wachstums- und Expressions-Optimierung durch verschiedene Induktionsmittel, Temperatur, Zelldichte, Kultivierungszeiten, Antibiotika, und Medien, um geringe Produktivitäten und unlösliche Proteinaggregate zu vermeiden.
Isolierung und Präparation von Inclusion-Bodies
Zellernte und Aufschluss
Baculovirus Expression
Transfektion von Insektenzellen, sowie Synthese und Bereitstellung von rekombinanten Insektenviren. Virusproduktion und Plaque-Reinigung
Versuchsexpression mit rekombinanter Virus-Klonen
Vervielfältigung und Reinigung von rekombinanter Baculoviren.
Virus Titer-Bestimmung und Bereitstellung von hochtitrigen Virus-Stamm-Mengen
Expressions-Optimierung von Sf9 oder HiFive Zellen bei verschiedenen Temperaturen, MOI, Wachstumsbedingungen, Medien,
Löslichkeitsbestimmungen
Massenkulturen und Proteinreinigung
Zell- bzw. Biomasse- Gewinnung ( auch aus konditionierten Medien) und Aufschluss- bzw. Lysat-Präparation
Hochdurchsatz-Screening Ihrer Plasmid-Konstrukte nach Ihren Auswahlkriterien
Produktion von hochtitrigen Virusmengen schon in einer Woche
Großfermentation
Hochdichte-Zellproduktion vom Schüttelkolben bis zum Bioreaktor
Zellgewinnung durch Durchfluss- und/oder Hochgeschwindigkeits-Zentrifugation
Niedertemperatur-, schaumfreie Hochdruckdispersion für Zellaufschluss bzw. Lysesystem
Leistungsdaten für die verwendeten Expressions-Systeme
System
Kapazität
Bakterien
Bereitstellung von transformierter Bakterienbiomasse (feucht) bis zum 3-Tonnenmaßstab
Bereitstellung homogener rekombinanter Proteine mit b > 98 % Reinheit, für die Kristallisation sowie
partiell gereinigter rekombinanter Proteine mit > 70 % Reinheit.
Hefe
Bereitstellung von transformierter Hefebiomasse für die Grobfermentation bis in den 3Tonnen-Maßstab
Bereitstellung von homogener rekombinanter Proteine mit Reinheit > 98 %, z.B. für die Kristallisation
Bereitstellung teilweise gereinigter Protein mit einer Reinheit von > 70
Bereitstellung von Großmengen an Protein, bis zu 1 kg
Baculovirus-Insektenzellen
Bereitstellung von hochtitrigen rekombinanter Virus-Mengen mit bis zu n109 pfu/ml, welche das gewünschte Kunden-Gen enthalten
Bereitstellung homogener rekombinanter Protein mit Reinheit > 98 %; z.B. für die Kristallisation
Bereitstellung teilgereinigter Protein mit einer Reinheit > 70 %
Bereitstellung von Großmengen an Protein, bis zu 1 kg
Bereitstellung einer Option zur Herstellung von Proteinen